Inhibition immunoblotting

08:40 Jun 24, 2019 

Пытался объяснить суть метода, но Вам это похоже ни к чему.
Надеюсь помогло автору вопроса разобраться в теме, если она еще за этим следит
Тролленьем(?) никогда в жизни не занимался, нет времени и желания тратить время впустую.
Спасибо, в личной жизни на данный момент все прекрасно
Вам тоже хорошего дня.

08:07 Jun 24, 2019 

Каждый раз какие-то новые ссылки даете, не имеющие никакого отношения к заданному вопросу.

Я Вам пишу, что два плюс два равно четырем.
Вы мне возражаете: нет, два плюс три равно пяти.
Я пишу, при чем тут "два плюс три", это разные примеры (методы).
Вы мне опять возражаете: "у этих "разных" примеров есть одно важное "общее" - оба они основаны на сложении двух чисел (на связывании антител с антигеном)"

Я просто не понимаю, чего Вы от меня хотите?
Развлекаетесь от нечего делать и троллите меня?
Зачем?
Давайте дальше самостоятельно забавляйтесь.
Удачи в личной жизни!

07:53 Jun 24, 2019 

Прямой конкурентный метод иммуноферментного анализа с иммобилизованным на твердую фазу антигеном. Этот анализ используется для обнаружения или количественного определения растворимых антигенов. Для этого используют антиген-специфические антитела, конъюгированные с соответствующим детектором (например, пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, рутений или флуоресцеин). На твердую фазу иммобилизован антиген с последующей блокировкой. Конъюгированное с ферментативной меткой антитело инкубируют с исследуемым веществом растворимым антигеном. Затем эту смесь добавляют к иммобилизованному антигену, инкубируют, а потом отмывают от несвязавшегося комплекса антиген-антитело. Следующий шаг заключается в добавлении подходящего субстрата. Ингибирование реакции, обусловленное наличием двух антигенов в системе, по сравнению с контрольным образцом без конкурентного растворимого антигена, является обратнопропорциональным значению количества исследуемого вещества.
https://tinyurl.com/yxnou6dp
Снова ничего общего? В случае иммуноблота антиген иммобилизован на мембране

Вопрос к Вашему варианту: Какую именно активность и каким образом ингибируют у антител?

20:47 Jun 23, 2019 

В Вашей же ссылке.

К сывороткам собак с антителами на аллергены C, WF и S (Seven dogs that were co‐positive to C, WF and S allergen extracts) добавляли, либо не добавляли растворы этих аллергенов (pre‐incubated with and without inhibitor extracts [C, WF, S ...). После инкубации в течение ночи (аллерген частично блокировал соответствующие антитела) эти сыворотки анализировали и судили о степени ингибирования по изменению оптической плотности (The percentage of inhibition was calculated according to the following formula: inhibition (%) = 100 – [(OD405 of serum with inhibitor/OD405 of serum without inhibitor) ×100], where OD405 was the absorbance at 405 nm.).
Еще раз.
Ингибировали антитела раствором антигена. Это позволяло судить о причине совместных аллергических реакций - то ли активные центры аллергенов похожи (тогда они вызывают перекрестную иммунную реакцию), то ли просто все эти 3 аллергена попадали в организм (и его сенсибилизировали отдельно) - Inhibition ELISAs were performed to ascertain if co‐positive IgE reactions were the result of immunological cross‐reactivity or simple co‐sensitizations.

Ну, и где здесь конкурентность? В чем она?

19:47 Jun 23, 2019 

И если заходить с другой стороны, что именно "ингибируется" в этом методе анализа?

19:43 Jun 23, 2019 

Посмотрите, пожалуйста статью, чтобы я не пересказывал контекст.
Речь о перекрестно-реактивных белках, как видно даже из цитаты Марии.
Что такое перекрестная реактивность, думаю, Вы знаете.
Вот цитата из той же статьи, откуда взят "вопрос Марии", и, в которую Вы почему-то упорно не хотите заглянуть (ссылка приведена ранее): The membrane was blocked with TBS containing 0.5% PVP10 at room temperature (RT) for 2 h. Sera were diluted 1:10 in TBST and pre‐incubated with and without inhibitor extracts [C, WF, S and, as a control, bovine serum albumin (BSA) each at a concentration of 800 μg/mL] at 2–8°C, overnight. Serum–inhibitor mixes were then incubated with membranes at RT overnight with moderate shaking.
Трудно судить, что авторы статьи называют inhibitor extracts - отдельный вопрос, но очевидно, что его содержимое конкурирует с антителами за связывание с перекрестно-реактивными белками.
Или еще не очевидно?

19:23 Jun 23, 2019 

зайдем с другой стороны.

Вот вопрос Марии:

In order to identify cross-reactive IgE-binding proteins in the three extracts, inhibition immunoblots were performed. Serum IgE-binding to C, WF and S extract proteins was almost completely abolished after the overnight pre-incubation with 800 lg/mL of their homologous inhibitor. For the most reactive proteins ... resulted in a similar reduction of IgE-binding as that obtained with the homologous C inhibitor, the 40 and 50 kDa C proteins being only just visible.

Что здесь с чем конкурирует? Какие процессы, за какой ресурс?

18:11 Jun 23, 2019 

Не лукавлю:
Ваши предпосылки для заключения, что: выбор варианта "конкурентный иммуноблоттинг" был бы явной ошибкой

> сначала инкубируют сыворотку с одним белком, а только потом с другим. Эти белки НЕ конкурируют между собой

Я дал ссылку на описание переводимой методики, из которой понятно, что белки (они же антитела) именно конкурируют за связывание с антигеном на мембране, и ссылку на то, что в английском competitive и inhibition используются как синонимы при описании методов иммуноанализа.
Ваш ответ:
Не понимаю, зачем Вы мне приводите какие-то ссылки на иммуноферментный анализ. ИФА (ELISA) и иммуноблоттинг - это разные методы.
Пытаюсь Вам объяснить свою точку зрения:
у этих "разных" методов есть одно важное "общее" - оба они основаны на связывании антител с антигеном, разница только в том, что представляет собой антиген
ингибирование ассоциируется больше с подавлением ферментативной активности
Ваш ответ?..

17:53 Jun 23, 2019 

Вы разве не читали мой первый ответ Вам?
Лукавите...

17:30 Jun 23, 2019 

Все аргументы в свою пользу, на мой взгляд, привел. Ваших возражений не увидел. Оставляем решать автору вопроса. Благодарю за пожелания.

13:00 Jun 22, 2019 

Судя по тому, что Вы уже начали обсуждать мою трудовую биографию, по существу рассматриваемого вопроса возражений не осталось?
Ну, и хорошо.
Творческих успехов!

06:18 Jun 22, 2019 

Приношу извинения, все-таки какой-то в прошлом имеете, просто не захотели разбираться
Если все-таки станет интересно, первая ссылка на статью, фрагмент из которой переводит Мария.

06:14 Jun 22, 2019 

Простите, ошибся, по Вашим ответам здесь думал, что Вы имеете практический опыт работы в биологии и что-то понимаете или сможете разобраться в обсуждаемом вопросе.
Открою секрет, у этих "разных" методов есть одно важное "общее" - оба они основаны на связывании антител с антигеном, разница только в том, что представляет собой антиген, о чем и говорит приставка иммуно- в их названии.
Успехов в семантическом анализе! )

04:09 Jun 22, 2019 

Не понимаю, зачем Вы мне приводите какие-то ссылки на иммуноферментный анализ. ИФА (ELISA) и иммуноблоттинг - это разные методы.
Может быть, Вы хотите придумать какой-то универсальный термин для всех случаев жизни?
В таком случае могу только пожелать успеха.
Я говорю только о контексте заданного вопроса.

22:10 Jun 21, 2019 

Игорь, если есть вдохновение разобраться кого с кем инкубировали, для точной информации о методе зайдите в оригинальную статью (мат и методы Inhibition immunoblotting там же Inhibition ELISA) https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/vde.12691

и примите во внимание следующее
Competitive ELISA. The key event of competitive ELISA (also known as inhibition ELISA) is the process of competitive reaction between the sample antigen and
https://www.bosterbio.com/media/pdf/ELISA_Handbook.pdf

Просто в русском (ИМХО) ингибирование ассоциируется больше с подавлением ферментативной активности...

21:54 Jun 21, 2019 

"иммуноблоттинг с ингибированием" есть моменты, которые можно критиковать. Я проголосовал за него только для того, чтобы облегчить выбор аскеру. Поскольку считаю, что выбор варианта "конкурентный иммуноблоттинг" был бы явной ошибкой.
В чем смысл слова "конкурентный"? Когда мы говорим о конкурентности мы подразумеваем, что происходит два (или более) процесса ОДНОВРЕМЕННО. Только при их одновременности возникает "конкуренция", соревнование.
Аскер же пишет, что сначала инкубируют сыворотку с одним белком, а только потом с другим. Эти белки НЕ конкурируют между собой.
Таким образом, мы видим, что несложный семантический анализ показывает непригодность варианта со словом "конкурентный" для описания данной ситуации.
Раз уж мы, при отсутствии устоявшегося русского термина, вынуждены придумывать некое описание, то хотя бы выберем из двух зол меньшее. И явно непригодный вариант отбросим.
Это мое личное мнение, я, конечно, могу ошибаться.
Остаюсь с уважением.

10:26 Jun 20, 2019 

Igor_2006
Иммуноблоттинг с ингибированием провели, используя в качестве ингибиторов хитиназу класса I.
Не очень убедительный пример - к сожалению тоже перевод с английского...

В таком варианте стоило хотя бы уточнить, что именно ингибировали:
Иммуноблоттинг с ингибированием связывания